「如何FFPE样本中获得高质量DNA？」带你解锁！

  FFPE样本是医学领域常见的生物材料。此类样本已经被大范围的应用于高通量测序、原位杂交、免疫组织化学等研究领域。目前，全球约有数亿FFPE组织样本,这些组织样本已经是疾病诊断和科学研究的最为宝贵的生物学资源之一。

  从FFPE中获得高质量核酸，是顺利推进下游实验的第一步。那么，如何从FFPE样本中获得高品质的核酸来进行下游实验呢？今天小编就来为您支招儿！

  FFPE（Formalin-fixed paraffin-embedding）即用将组织或细胞固定后用石蜡包埋，是一种组织或细胞保存技术。中的甲醛可以与蛋白质的氨基结合，使蛋白质凝固变性，保持组织细胞结构的完整性。通过FFPE技术处理得到的样本我们称为FFPE样本，因实际使用时会切成薄片，也称石蜡切片。

  这项技术长期以来在临床检验、医学科学研究中得到普遍应用，尤其是细胞形态学研究和肿瘤病理学研究，如：HE染色、免疫组化及荧光原位杂交等。随着分子生物学的发展，FFPE样本在分子诊断及研究的应用需求慢慢的变多。目前在NGS医检所中，除去血液样本，接收的所有组织样本几乎均为蜡块、白片、蜡卷等FFPE样本。为了能够更好的保证实验数据的准确性与真实性，从FFPE样本中纯化出高质量的核酸十分重要。

  核酸的提取与纯化，是FFPE样本核算检验测试的第二步，其质量直接影响后续的PCR、测序等分析的顺利进行，在检测流程中占据非常非常重要的地位。

  核酸提取的原则首先保证一级结构的完整性，其次要排除其它分子的污染。FFPE样本由于经历了固定以及石蜡包埋的双重处理，使样本内部发生了变化，从而给该样本的核酸提取带来了诸多挑战。

  ·在FFPE样本的制备过程中，组织经固定、石蜡包埋时很容易引起DNA的降解，长期的储存也会导致核酸进一步降解

  ·DNA损伤的变异数量和类型，如果忽略，可能会对最终结果产生负面影响，这对下游应用比如测序的影响是巨大的：从简单测序文库构建的失败到虚假文库的产生，最后导致结果的错误。

  样本要求：选择正真适合大小的组织块制作石蜡包埋组织样本，一般不超过15x10x5mm。

  固定液选择：建议使用10%中性固定液对组织做固定，固定液应为被固定标本体积的5-10倍，并定期更换。

  固定时间：根据样本情况调节固定时间，一般在24-48h为宜，固定时间过长会加重FFPE DNA的片段化。

  切片厚度：包埋好的组织样本根据要确定切片厚度，标准切片厚度为4μm，用于核酸提取的切片可以在10-20μm，保证切片厚度的持续稳定。

  工欲善其事，必先利其器，提取FFPE是所有研究开始的第一步。目前市场上有多种提取试剂盒，选择正真适合的试剂盒才能保证实验的成功率。为了能更好地从FFPE样本中获取足量的高质量的核酸，凡知医学研发出针对FFPE样本的核酸提取试剂盒。

  本产品采用独特的无二甲苯的脱蜡配方裂解释放石蜡切片组织中的微量DNA，并利用经过特殊修饰的纳米级超顺磁性微球对DNA进行选择性吸附，以此来实现高质量DNA的提取。

  适用于临床检验中肿瘤组织基因突变检测、个性化药物疗法的诊断等核酸类检验测试的项目的样品前处理。

  快速安全：2小时内就可以完成实验，不依赖毒性有机溶剂（如二甲苯）进行脱蜡，使用安全。

  产物纯度高：采取了特殊表面处理的纳米级超顺磁性微球可特异性吸附DNA，污染低。

  场景灵活：既可支持手动提取，又可高效的与液体工作站或全自动核酸提取仪配套使用，以进行快速、大样本量的提取，提升整体效率。

  利用本试剂盒产品对切片（编号1-3为一组，编号4-6为一组）提取DNA，通过Nanodrop仪测试浓度。结果显示两组数据A260/A280比值结果均在1.8-2.0之间，蛋白、盐类等杂质污染少，纯度高；通过组内及组间对比，显示结果均一稳定。

  凡知医学的组织石蜡切片基因组DNA提取试剂盒，独特的无二甲苯的脱蜡配方，提取的DNA纯度更高。可兼容市面上的主流高通量自动化核酸提取仪，搭配FireAuto32/96全自动核酸提取仪效率更加高，一步加样，自动完成所有实验流程，结果更稳定可靠。返回搜狐，查看更加多