【48812】引荐：甲酰胺 溶液@2024已更新

  ELISA （Enzyme-Linkedimmunosorbent assay）的根底是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶符号。这一办法的根底原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体外表，并坚持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保存其免疫活性，又保存酶的生机。在测守时，把待测样本（测定其间的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的过程与固相载体外表的抗原或抗体起反响。用洗刷的办法使固相载体上构成的抗原抗体复合物与其他物质分隔， 结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成必定的份额。参加酶反响的底物后，底物被酶催化变为有色产品，产品的量与标本中受检物质的量直接相关，所以可根据色彩反响的深浅定性或定量分析。因为酶的催化速率很高，所以可极大地扩大反响效果，然后使测定办法到达很高的灵敏度。酶联免疫吸附实验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技能中运用最广的技能。其根本办法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反响板 ) 外表，使酶符号的抗原抗体反响在固相标明上进行，用洗刷法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。自从Engvall和Perlman(1971）报导树立酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以来，因为ELISA具有快速、灵敏、简洁、易于规范化等长处，使其得到敏捷的开展和广泛运用。虽然前期的ELISA因为特异性不够高而阻碍了其在实践中运用的脚步，但随着办法的一向在改善、资料的一向更新，尤其是选用基因工程办法制备包被抗原，选用针对某一抗原表位的单克隆抗体进行阻断ELISA实验，都大幅度的提升了ELISA的特异性，加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的运用，使ELISA更为简洁有用和规范化，然后使其成为最广泛运用的检测的新办法之一。现在ELISA办法已被大范围的运用于多种细菌和病毒等疾病的确诊。在动物检疫方面，ELISA在猪、蓝舌病等的确诊中已为广泛选用的规范办法。ELISA办法的根底原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改动抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。此种酶符号抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体产生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶效果下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，呈现色彩反响。因而，可通过底物的色彩反响来断定有无相应的免疫反响，色彩反响的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反响可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反响的灵敏性和抗原抗体反响的特异性结合起来，使ELISA办法成为一种既特异又灵敏的检测的新办法。用于符号抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和灵敏性；在室温下安稳；反响产品易于闪现；能商品化出产。现在运用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其间以HRP运用。过氧化物酶（HRP）广泛散布于植物中，辣根中含量高，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%），分子量约40 000，约由300个氨基酸组成，等电点为pH 3-9，催化反响的最适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的吸收光谱分别为275nm和403nm。纯酶的RZ多在3.0以上，高为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶，非酶蛋白约占 75%，不能用于符号。RZ在2.5以上者方可用于符号。HRP的效果底物为过氧化氢，催化反响时的供氢体有几种：⑴邻苯二胺（OPD），产品为橙色，可溶性，灵敏性高，吸收值在490nm，可用肉眼调查判别，简单被浓硫酸停止反响，色彩可在数小时内不改动,是目前国内ELISA中最常用的一种；⑵联大茴香胺（OD），产品为橘黄色，吸收值在400nm，色彩较安稳；⑶5－氨基水杨酸(5－AS）：产品为深棕色，吸收值在449nm，部分溶解，灵敏性较差；⑷邻联甲苯胺（OT）产品为蓝色，吸收值在630nm，部分溶解，不安稳，不耐酸，但反响快，色彩显着。系从小牛肠粘膜和大肠杆菌中提取，由多个同功酶组成。它们的底物品种许多，常用者为硝基苯磷酸盐，廉价无毒性。酶解产品呈黄色，可溶，吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反响体系中，37℃1分钟水解1μg磷酸苯二钠为一个单位。